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    間接炭凝反應

    放大字體  縮小字體 發布日期:2006-06-27

    原理

    間接炭凝集反應簡稱炭凝。它是以炭粉微粒作為載體,將已知的抗體球蛋白吸附于這種載體上,形成炭粉抗體復合物,當炭血清與相應的抗原相遇時,二者發生特異性結合,形成肉眼可見的炭微粒凝集塊。

    目前炭凝反應已用于炭疽、鼠疫和馬副傷寒性流產等病的診斷。


    材料與試劑

    1.炭粉 炭粉粒子最好大小在0.12mm~0.15mm,目前市場上出售的炭粉均不合要求,必須過300目/寸的標準篩以300r/min離心去沉淀,再以3 000r/min離心去上清,收集沉淀物。

    2.高免血清

    3.待測標本

    4.滅活兔血清

    5.正常血清

    6.標準抗原

    7.0.05mol/L pH7.2PBS液

    8.1%硼酸的PBS液


    操作方法

    1.炭致敏 取濕炭粉0.25g(干粉0.10g),加入經56℃~60℃滅活30min的稀釋高免血清3ml,充分搖勻,置37℃致敏30min,不時搖動,取出后用pH 7.2 PBS液洗滌3次。最后一次用含1%硼酸和1%兔血清的PBS液洗滌一次,離心去上清,再取此液3ml,混勻即可。同時以正常血清致敏的炭粒處理,以作對照。

    致敏血清(加1/萬硫柳汞防腐)于室溫或4℃冰箱中保存,一年內有效。

    2.取潔凈玻璃板一塊,以玻璃鉛筆劃成小格,加被檢標本0.10ml,再加免疫炭血清0.05ml,充分混勻,靜止1min~5min,判定結果。同時設三個對照:

    ⑴免疫炭血清 標準抗原。

    ⑵正常炭血清 標準抗原。

    ⑶正常炭血清加待檢抗原。


    結果判定

    在對照完全成立的情況下,判定本試驗結果:

    “++++”:炭粉全部凝集,液體完全清亮透明。

    “+++” :炭粉大部分凝集,液體透明。

    “++” :炭粉一半凝集,液體較透明。

    “+” :炭粉微凝集,但與對照有差別,液體混濁。

    “—” :炭粉不凝集,液體不透明。

    炭凝以“++”做為反應滴度的終點。

     
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