酶標抗體的鑒定

1．酶標抗體的活性鑒定 一般以瓊脂擴散和免疫電泳進行鑒定。使酶標抗體和相應的抗原(抗原濃度為1mg/ml)產生沉淀線,洗滌后于底物溶液中顯色,顯色后用生理鹽水漂洗,沉淀線不褪色,說明酶和抗體都具有活性。良好的酶標結合物瓊脂擴散滴度一般應在1：16以上。

2．酶結合物的定量測定 包括酶量、IgG含量、酶與IgG克分子比值以及結合率的測定。

酶量(µg/ml)=OD_403nm×0.42

（1）戊二醛法：IgG(mg/ml)=(OD_280nm－OD_403nm×0.42)×0.94×0.62

(OD₄₀₃×0.42為酶在403nm的光密度，抗體與酶－戊二醛結合后OD_280nm約增加6%，所以乘以0.94校正。由于兔IgGOD_280nm=1.0時為0.62mg，所以又乘以0.62)。

（2）過碘酸鈉法：IgG(mg/ml)=(OD₂₈₀－OD₄₀₃×0.30)×0.62

(3)克分子比值=(酶ug/m) /40000/[(IgG mg/ml) / 160 000]=酶X4 /IgG

(40 000和160 000分別為辣根過氧化物酶和IgG的分子量)。

⑷ 酶結合率=結合物中的酶量/標記時加入的酶量×100%。

⑸ 酶標記率：OD_403nm/OD_280nm即酶中正鐵血紅素輔基的吸光度(403nm)與抗體－酶蛋白中的色氨酸、酪氨酸的吸光度(280nm)之比表示HRP在Ab^E中所占的比例，它與E/Ab克分子比值呈高度正相關。

3．酶結合物的質量標準 純化的酶結合物的質量標準應包括以下幾個方面。

（1）酶的催化活性。

（2）免疫學活性。

（3）未聯接的游離酶的量。

（4）未聯接的原始免疫反應物的量。

（5）每個酶分子所聯接的免疫反應物分子數目。

（6）生化性質。

（7）酶標記免疫試驗效果。

酶結合物的質量差異,可引起試驗敏感度的很大變化。例如用不同的程序制得的HRP－IgG結合物進行酶標記免疫試驗，可得到不同的試驗結果，故應予重視。

用于ELISA酶標抗體的各項指標參數