同位素標(biāo)記是一種重要的抗體標(biāo)記技術(shù)，牨977年Yalow等在放射免疫測定法所作突出貢獻(xiàn)而獲得醫(yī)學(xué)和生理學(xué)諾貝爾獎(jiǎng)。McAb標(biāo)記同位素后除應(yīng)用于放射免疫測定外，還可用于競爭結(jié)合試驗(yàn)、體內(nèi)腫瘤定位等。
(一) 原理
氯胺桾即對(duì)甲苯碘氯胺鈉，在水溶液中生成次氯酸，為一種溫和氧化劑，當(dāng)加入到有蛋白質(zhì)和碘的弱堿水溶液中，可將I２氧化為I＋并結(jié)合到氨基酸上。如標(biāo)記條件溫和，標(biāo)記后的McAb仍具有良好的結(jié)合活性，通過放射性同位素強(qiáng)度的測定可反映相應(yīng)抗原的含量。
(二) 方法
在細(xì)胞凍存管內(nèi)加入純化的McAb100μg／100μl，
再加入10μl 0.05M磷酸緩沖液
再加入10μl(含1mCi)125I
↓
加入10μl氯胺-T(5mg／ml溶于0.05M磷酸鹽緩沖液)，孵育時(shí)間不超過30秒
↓
加入100μl偏重亞硫酸鈉(1.2mg／ml溶于0.05M磷酸緩沖液)
↓
加入200μl KI溶液(少許結(jié)晶KI溶于0.05M磷酸緩沖液＋4％牛血清白蛋白)
↓
用PD10柱(Sephadex G25)除去游離125I
用4％BSA PBS洗脫
↓
分部收集，0.5ml／管
每管取5μl進(jìn)行γ計(jì)數(shù)，計(jì)算標(biāo)記抗體的比活性和標(biāo)記率
結(jié)合于McAb１２５I放射性強(qiáng)度(cpm)
標(biāo)記率(％)＝───────────────────
總放射性強(qiáng)度(cpm)
結(jié)合于某一管McAb上的放射性強(qiáng)度
比活性(μCi／μgMcAb)＝────────────────
某一管McAb總量
(三) 試劑器材
1. 純化后的McAb
2. 0.05M磷酸緩沖液，氯胺桾，偏重亞硫酸鈉，KI，BSA
3. 125I
4. 有通風(fēng)裝置的超凈臺(tái)，γ計(jì)數(shù)儀
5. PD10柱(Sephadex G25)
(四) 注意事項(xiàng)
1. 嚴(yán)防同位素污染，工作人員必須穿著工作衣，戴口罩、帽子、手套。必須在嚴(yán)密的通風(fēng)櫥或通風(fēng)超凈臺(tái)中操作。操作前后對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行監(jiān)測。所用125I和標(biāo)記物應(yīng)妥善保管。
2. 如標(biāo)記細(xì)胞因子、激素等，應(yīng)選用更溫和的標(biāo)記方法，使保持更好的生物學(xué)活性。