cellulase活性的檢測(cè)方法很多，包括：
1.棉線切斷法；
采用Monod 恒溫振蕩器,將縫紉機(jī)線(15 支紗) 的一端浸入含有5 ml 酶液的試管中,
pH 5. 0 ,40 ℃,72 r·min - 1振蕩測(cè)定紗線切斷所需時(shí)間,以此來得到酶活力。
2.濾紙崩潰法
采用Monod 恒溫振蕩器,將兩片濾紙(1 ×1 cm) 加入裝有5 ml 酶液試管中,40 ℃,72
r·min - 1 ,pH 4. 0 。計(jì)算濾紙完全崩潰所需要的時(shí)間,求得酶活力。
3.濁度法
用0. 03 % Avicel 在pH 5. 5 ,40 ℃下經(jīng)T. koningii 酶液作用后,用其濁度的減少代表C1酶活。
4.羧甲基纖維素鈉(CMC2Na) 為底物的粘度減少和還原力生成的測(cè)定法。
1）CMC 粘度降低的方法(旋轉(zhuǎn)粘度計(jì)法)
底物溶液100 g ,加酶液5 ml ,30 ℃,反應(yīng)18 min ,采用旋轉(zhuǎn)粘度計(jì)測(cè)定底物第3 分鐘和第18 分鐘的粘度。用公式算出纖維素酶活單位。
2）CMC 粘度降低的方法(工研法)
底物溶液9 ml ,加酶液1 ml ,40 ℃,測(cè)定底物粘度減至一半時(shí)所需時(shí)間,以奧氏粘度計(jì)
測(cè)定。以10 min 能使底物粘度降低一半的酶活做為一個(gè)單位。
3）還原糖增加法
底物溶液9 ml ,加酶液1 ml ,40 ℃,反應(yīng)15 min ,在此條件下,生成相當(dāng)于1 mg 葡萄糖
的還原力為一個(gè)酶活力單位。
5.巴魯阿- 斯溫(Barnch and swain) 測(cè)定法
以水楊酸為底物,根據(jù)被水解出的水楊醇和β2D2葡萄糖的多少以比色法測(cè)定β2葡萄糖苷酶活力。
6.染色纖維素法
用Remazol 亮蘭使濾紙、纖維素粉或微晶纖維素等染色,酶解后在595 nm 下測(cè)釋放的著色化合物的光吸收值,以其代表酶活。
7.快速測(cè)定纖維素酶CMC 液化活力法〔4〕
以鉻礬作交聯(lián)劑,使羧甲基纖維素交聯(lián)產(chǎn)生粘度較大的凝膠,如瓊脂培養(yǎng)基一樣,通過凝膠液化的程度和快慢來觀測(cè)酶活的高低。此法簡(jiǎn)便易行,目測(cè)即可,用于菌種初篩十分方便。
1 ml 酶液,加入10 ml 鉻礬液,加入CMC 20 ml ,50 ℃保溫,觀察液化情況。
8.平板法
在菌種選育工作中都希望在平板上對(duì)產(chǎn)生菌直接進(jìn)行篩選,這是提高工作效率的關(guān)鍵。磷酸膨脹纖維素易于制成均勻的雙層平板,纖維素酶也易形成清晰的透明圈,已在產(chǎn)纖維素酶真菌選育中廣為應(yīng)用。
在以上的各種檢測(cè)方法中，用的比較多的可能就是還原糖增加法。此外還有很多的方法用來檢測(cè)單一纖維素酶組分活力。