RAPD操作要點

　　一、 材料
　　不同來源的DNA(50ng/ul)。
　　二、設備
　　PCR儀，PCR管或硅化的0.5ml eppendorf管，電泳裝置。
　　三、試劑
　　1、隨機引物(10mer) (5umol/L)：購買成品。
　　2、Taq酶：購買成品。
　　3、10xPCR 緩沖液：配方見第八章。
　　4、MgCl2 ：25mmol/L。
　　5、dNTP：每種2.5mmol/L。
　　四、操作步驟：
　　1. 在25ul反應體系中,加入
　　　　模板DNA 1ul (50ng)
　　　　隨機引物 1ul (約5pmol)
　　　　10xPCR Buffer 2.5ul
　　　　MgCl2 2ul
　　　　dNTP 2ul
　　　　Taq酶 1單位（U）
　　　　加ddH2O 至 25ul
　　混勻稍離心, 加一滴礦物油。
　　2. 在加熱至90℃以上的PCR儀中預變性94℃ 2分鐘, 然后循環: 94℃ 1分鐘， 36℃ 1分鐘， 72℃ 1分鐘，共40輪循環。
　　3. 循環結束后, 72℃ 10分鐘，4℃保存。
　　4. 取PCR產物15ul加3ul上樣緩沖液(6x)于2% 瓊脂糖膠上電泳, 穩壓50-100Ｖ（電壓低帶型整齊， 分辨率高）。
　　5. 電泳結束，觀察、拍照。
　　[注意] 1、電泳時一般RAPD帶有5-15條, 大小0.1-2.0kb。
　　　　　　2、 特異性的DNA帶可以克隆作為一個新的分子標記應用。