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    基因克隆的方法策略選擇原則

    放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01

    類(lèi)型I已知基因的序列
    (1)已知DNA序列,包括三種情況,一是已知目的基因的DNA全部或部分DNA序列(與題目要求略有出入);二是已知其它物種的同類(lèi)基因的DNA序列(功能可能已知,與題目要求略有出入);三是已知目的基因cDNA全部或部分序列(屬于題目要求已達(dá)到的類(lèi)型)。
    (2)已知目的基因表達(dá)產(chǎn)物蛋白等序列。
    在這兩種情況下一般采用PCR技術(shù)或探針?lè)肿与s交技術(shù)分離克隆目的基因。

    類(lèi)型II已有基因圖位或標(biāo)記,轉(zhuǎn)座子等條件,分別可采用轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽法、T-DNA標(biāo)簽法及圖位克隆技術(shù)進(jìn)行分離克隆目的基因。


    類(lèi)型III為止目的基因序列
    (1)差異表達(dá)序列,即目的基因表達(dá)具有組織、器官等時(shí)空差異性。可以采用隨機(jī)引物多態(tài)性擴(kuò)增技術(shù),定向引物擴(kuò)增技術(shù)和DDRT-PCR、SSH-PCR、RAP-PCR、DNA-RDA、cDNA捕捉法等進(jìn)行克隆。
    (2)無(wú)差異表達(dá)的目的基因,可采用文庫(kù)篩選法、功能蛋白分離法即直接測(cè)須發(fā)等進(jìn)行,是難度較大較繁瑣的策略。
    從基因分離克隆的方法進(jìn)行分類(lèi)可分為三類(lèi):一種類(lèi)型是功能克隆,即根據(jù)已知基因的產(chǎn)物推斷出其相應(yīng)核苷酸序列,再根據(jù)此序列合成寡聚核苷酸探針。從cDNA文庫(kù)或基因組文庫(kù)中調(diào)取目的基因。第二種類(lèi)型是表型克隆。是近年來(lái)發(fā)展十分迅速的一類(lèi)方法,例如差異篩選法、差減雜交(SH)、mRNA差別顯示技術(shù)(DDRT-PCR)、代表性差異分析(RAD)抑制型差減雜交(SSH)等。第三類(lèi)是無(wú)基因序列及表達(dá)功能信息,但具有基因遺傳圖,轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽等條件,常用圖位克隆和轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽法克隆。

     

     

     
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