<ul id="8aumu"></ul>
  • <strike id="8aumu"></strike>
  • <ul id="8aumu"></ul>
    VIP標識 上網做生意,首選VIP會員| 設為首頁| 加入桌面| | 手機版| RSS訂閱
    食品伙伴網服務號
     
    當前位置: 首頁 » 食品專題 » 生物實驗技術 » 細胞實驗技術 » 正文

    細胞周期測定

    放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-08

    一、原理
    細胞周期指細胞一個世代所經歷的時間。從一次細胞分裂結束到下一次分裂結束為一個周期。細胞周期反應了細胞增殖速度。
    單個細胞的周期測定可采用縮時攝影的方法,但它不能代表細胞群體的周期,故現多采用其他方法測群體周期。
    測定細胞周期的方法很多,有同位素標記法、細胞計數法等,這里介紹一種利用BrdU滲入測定細胞周期的方法。
    BrdU(5-溴脫氧尿嘧啶核苷)加入培養基后,可做為細胞DNA復制的原料,經過兩個細胞周期后,細胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/2,反映在染色體上應表現為一條單體淺染。如經歷了三個周期,則染色體中約一半為兩條單體均淺染,另一半為一深一淺。細胞如果僅??艘桓鮒芷冢?蛄教醯ヌ寰?釗盡<品至嚴嘀懈髕詒壤??涂傷慍魷赴?芷詰鬧怠?/SPAN>
    二、儀器、用品與試劑
    1、儀器、用品:同常規細胞培養
    2、試劑:BrdU(1.0mg/ml),甲醇、冰醋酸,Giemsa染液,秋水仙素,2×SSC液
    三、操作步驟
    1、細胞生長至指數期時,向培養液中加入BrdU,使最終濃度為10μg/ml。
    2、44小時加秋水仙素,使每ml中含0.1μg。
    3、48小時后常規消化細胞至離心管中,注意培養上清的漂浮細胞也要收集到離心管中。
    4、常規染色體制片(見第三部分:染色體技術)。
    5、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上,鋪上2×SSC 液,距紫外燈管6cm處紫外照射30分鐘。
    6、棄去2×SSC液,流水沖洗。
    7、Giemsa液染色10分鐘,流水沖洗,晾干。
    8、鏡檢100個分裂相,計第一、二、三、四細胞期分裂指數。
    9、計算:

    細胞周期(Tc)=48/{(M1 2M2 3M3 4M4)/100}(小時)

    附:(1)BrdU配制: BrdU 10mg十雙蒸水10ml 4℃下避光保存。
    (2)2×SSC配制: NaCl 1.75克,檸檬酸三鈉·2H2O 0.88克,加水至100ml,4℃保存。

     
    [ 網刊訂閱 ]  [ 食品專題搜索 ]  [ ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關閉窗口 ] [ 返回頂部 ]

     

     
    推薦圖文
    推薦食品專題
    點擊排行
     
     
    Processed in 0.411 second(s), 819 queries, Memory 2.59 M